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大鼠ELISA試劑盒的樣品處理注意要點及操作步驟
更新時間:2016-05-31 點擊次數(shù):1214

   大鼠ELISA試劑盒加酶結(jié)合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器,使加液過程迅速完成。應當注意以下幾點

1.血清:
標本請于室溫放置2小時或4℃過液后于1000g,4℃離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃保存,但應避免反復凍融。
2.細胞培養(yǎng)物上清:
細胞培養(yǎng)物于室溫1000g,離心10分鐘后收集上清,并將標本保存于-20℃,且應避免反復凍融。
3.組織勻漿:
將組織標本先用PBS洗滌,除去多余血液,勻漿化后放在PBS于-20℃放置過液,再經(jīng)過二次反復凍融破膜,5000g,4℃離心5分鐘,取上清即可檢測。
4.血漿:
ELISA試劑盒可用EDTA或肝素作為抗凝劑標本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃,1000g離心15分鐘,小鼠ELISA試劑盒或?qū)吮痉庞?20℃保存,但應避免反復凍融。
5.尿液:
無菌收集取初尿,離心除去沉淀物,即可用于檢測,要長期保存尿樣,可以加入0.05%的NaN3在4-8℃保存,或加入尿樣冰凍保護液放入-20℃冰箱長期保存。

操作步驟:

1.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
2.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
3.配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
5.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
6.溫育:操作同3。
7.洗滌:操作同5。
8.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
9.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
10.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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