大鼠ELISA試劑盒加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。應當注意以下幾點
1．血清：
標本請于室溫放置2小時或4℃過液后于1000g，4℃離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
2．細胞培養物上清：
細胞培養物于室溫1000g，離心10分鐘后收集上清，并將標本保存于-20℃，且應避免反復凍融。
3．組織勻漿：
將組織標本先用PBS洗滌，除去多余血液，勻漿化后放在PBS于-20℃放置過液，再經過二次反復凍融破膜，5000g，4℃離心5分鐘，取上清即可檢測。
4．血漿：
ELISA試劑盒可用EDTA或肝素作為抗凝劑標本采集后30分鐘內于2-8℃,1000g離心15分鐘，小鼠ELISA試劑盒或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
5．尿液：
無菌收集取初尿，離心除去沉淀物，即可用于檢測，要長期保存尿樣，可以加入0.05％的NaN3在4-8℃保存，或加入尿樣冰凍保護液放入-20℃冰箱長期保存。
操作步驟：
1.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
2.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
3.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
5.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
6.溫育：操作同3。
7.洗滌：操作同5。
8.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
9.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
10.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
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