實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境與操作結(jié)果及安全性有著不可分割的密切關(guān)系，要求工作環(huán)境清潔、空氣清 新、干燥燥和無(wú)煙塵，今天我們就以細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)為例，與您論實(shí)驗(yàn)室環(huán)境要求達(dá)標(biāo)的重要性 。
一、常用設(shè)備
1.超凈工作臺(tái)：也稱(chēng)凈化工作臺(tái)，分為側(cè)流式，直流式和外流式三大類(lèi)。
2.無(wú)菌操作間：一般由更衣間，緩沖間和操作間三部分組成。操作間放置凈化工作臺(tái) 及二氧化碳培養(yǎng)箱，離心機(jī)，倒置顯微鏡等。緩沖間可放置電冰箱，冷藏器及消毒好的無(wú) 菌物品等。
3.操作間：普通培養(yǎng)箱，離心機(jī)，水浴鍋，定時(shí)鐘，普通天平及日常分析處理物。
4.洗刷消毒間：烤箱，消毒鍋，蒸餾水處理器及酸缸等。
5.分析間：顯微鏡，計(jì)算機(jī)及打印機(jī)等。
二、合適的氣體環(huán)境
氣體是哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣 參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的能量和合成細(xì)胞生長(zhǎng)所需用的各種成分。開(kāi)放 培養(yǎng)時(shí)一般把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。
二氧化碳既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物，也是細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所需成分，它在細(xì)胞培養(yǎng)中的主要作 用在于維持培養(yǎng)基的pH值。大多數(shù)細(xì)胞的適宜pH為7.2-7.4，偏離這一范圍對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)將產(chǎn) 生有害的影響。但細(xì)胞耐酸性比耐堿性大一些，在偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長(zhǎng)。但有一些 細(xì)胞也喜歡偏堿環(huán)境中生長(zhǎng)，如成纖維細(xì)胞pH是7.4-7.6.每種細(xì)胞都有其zui適pH值 。
三、細(xì)胞培養(yǎng)溫度
維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長(zhǎng)，必須有恒定而適宜的溫度。不同種類(lèi)的細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)溫度要求 也不同，人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細(xì)胞的正常代謝 會(huì)受到影響，甚至死亡。培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)低溫的耐受力較對(duì)高溫強(qiáng)，溫度上升不超過(guò)39℃時(shí)， 細(xì)胞代謝與溫度成正比；人體細(xì)胞在39-40℃1小時(shí)，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復(fù) ；在40-41℃1小時(shí)，細(xì)胞會(huì)普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢復(fù)；41-42℃1小時(shí)，細(xì)胞受 到嚴(yán)重?fù)p傷，大部分細(xì)胞死亡，個(gè)別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能；當(dāng)溫度在43℃以上1小時(shí)，細(xì)胞全 部死亡。相反，溫度不低于0℃時(shí)，對(duì)細(xì)胞代謝雖有影響，但并無(wú)傷害作用；把細(xì)胞放入 25-35℃時(shí)，細(xì)胞仍能生存和生長(zhǎng)，但速度減慢；放在4℃數(shù)小時(shí)后，再回到37℃培養(yǎng)，細(xì) 胞仍能繼續(xù)生長(zhǎng)。細(xì)胞代謝隨溫度降低而減慢。當(dāng)溫度降至冰點(diǎn)以下時(shí)，細(xì)胞可因胞質(zhì)結(jié) 冰受損而死亡。但是，如果向培養(yǎng)液中加入一定量的冷凍保護(hù)劑(二甲亞砜或甘油)，可在 深低溫下如-80℃或-196℃(液氮)長(zhǎng)期保存。
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